重组Cas 9，基因工程生产，大肠杆菌表达。

一. 产品简介

Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可对抗入侵的病毒及外源DNA，可以将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR序列中，通过相应的CRISPR RNAs（crRNAs）来指导Cas9蛋白对同源序列的降解，进而提供免疫性。根据CRISPR/Cas系统的特性，科学家将其改造成了目前最高效的基因组编辑工具。

Cas9系统由三个原件构成：tracrRNA+crRNA嵌合成的sgRNA（single guide RNA）+宿主DNA序列上的PAM序列（protospacer adjacent motif）+Cas9剪刀（最常用的是化脓性链球菌来源的SpCas9蛋白）。sgRNA引导Cas9剪刀到与sgRNA的5’末端碱基互补的（长约20nt的）靶序列处，紧接这段互补序列下游若存在能被Cas9蛋白识别的PAM序列（SpCas9特异性识别的PAM是由3bp组成的NGG序列，N代表任意碱基），Cas9剪刀就会用两个核酸酶结构域HNH和RuvC（在3～4nt upstream of PAM的位点）剪开DNA两条链，最终形成双链断裂double-strandedbreak (DSB)。

二. 产品特性

1. 性状 透明液体

2. 纯度 纯度≥90%（SDS-PAGE/SEC-HPLC）

3. 宿主蛋白质残留量 小于100ng/mg

4. 细菌内毒素 小于10EU/mg

5. 宿主DNA残留量 小于10ng/mg

6. DNA酶残留 阴性

7. RNA酶残留 阴性

8. 外切酶活性 大于等于80%

9. 浓度 大于等于5mg（ABS）

三. 产品应用

基因敲除（Knock-out） 简称KO

Cas9蛋白可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式对断裂的DNA进行修复。但是，在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象，造成移码突变使靶标基因失去功能，从而实现基因敲除。为了提高CRISPR系统的特异性，可将Cas9的一个结构域进行突变，形成只能对DNA单链进行切割造成DNA缺口的Cas9核酸酶，想要形成双链断裂的效果可以设计两条sgRNA序列，两条sgRNA特异性的靶向结合DNA互补的两条链的靶标序列，即可形成DNA断裂，并在修复过程中通过移码突变实现基因敲除。

基因敲入（Knock-in） 简称KI

当DNA双链断裂后，如果有DNA修复模板进入到细胞中，基因组断裂部分会依据修复模板进行同源重组修复（HDR），从而实现基因敲入。HDR修复模式在细胞中发生率较低，通常小于10%。为了增加基因敲入的成功率，目前有很多科学家致力于提高HDR效率，将编辑的细胞同步至HDR最活跃的细胞分裂时期，促进修复方式以HDR进行；或者利用化学方法抑制基因进行NHEJ，提高HDR的效率。

多重编辑（Multiplex Editing）

将多个sgRNA质粒转入到细胞中，可同时对多个基因进行编辑，具有基因组功能筛选作用。多重编辑的应用包括：使用双Cas9 nickases提高基因敲除的准确率、大范围的基因组缺失及同时编辑不同的基因。通常情况下，一个质粒上可以构建2～7个不同的sgRNA进行多重CRISPR基因编辑。

四. 储存和运输稳定性

储存稳定性：-25至-15℃温度下，两年有效。

运输稳定性：冷藏运输，活性稳定。

注意：本产品不建议-80℃保存，反复冻融会降低本产品的酶活性。

五. 产品优势

无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。

质量稳定：批量生产（稳定生产供应100g），可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。

纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。

符合法规要求：生产设备和生产环境符合相关法规要求，生产过程完全符合GMP指导原则。

质量文件完整：按客户需求，可提供相关法规支持文件。

六. 相关产品

重组sumo酶；

重组TEV酶；

重组肠激酶。

仅供科研生产使用，不能用于人体。